新型冠状病毒疫情爆发以后，早期诊断成为控制疫情的关键，而荧光PCR技术成为首选的初筛检测手段。目前核酸检测率只有30-40%，使得检测试剂盒的灵敏度备受关注。本期推荐林镜中博士从引物探针设计的角度对试剂盒灵敏度的分析，以飨读者。
一、前言
新型冠状病毒疫情爆发以后，早期诊断成为控制疫情的关键，而荧光PCR技术成为首选的初筛检测手段。到目前为止已经有数家企业获得了新型冠状病毒荧光PCR检测试剂的临床注册批文，还有近百家企业开发了类似的产品。近期有诸多声音反映现有的新型冠状病毒荧光PCR检测试剂盒灵敏度较低，目前检出率只有30-40%，多次出现漏检的情况。业界对此进行了广泛的讨论，一个共识是造成检出率低，假阴性率高有很多原因，包括试剂盒的灵敏度、试剂盒原材料的质量、核酸提取的效率、仪器设备的质量、操作误差等，但是对试剂盒的灵敏度低的原因没有系统的分析。笔者认为，引物探针设计是决定试剂灵敏度的关键，设计上存在的问题是内在缺陷，很难通过优化试剂盒组分和调整实验条件来得到显著改善。
早期诊断的灵敏度事关新型冠状病毒疫情防控的成败，同时今后将有一大批企业申报该产品的注册批文，最终推向检测市场，对人民健康产生深远的影响。疫情爆发后，世界卫生组织（WHO）发表了多个国家设计的新型冠状病毒荧光PCR引物探针序列。笔者常年从事分子检测试剂的研究开发，特别是荧光PCR技术。新型冠状病毒疫情爆发后，我们也进行了相关产品的研发，我们发现WHO发布的来自不同国家的引物探针设计，有些存在比较明显的缺陷。本文以美国CDC设计的N基因引物探针为例，论述Taqman荧光PCR引物和探针设计的基本原则，并提出一些建议，供同行们参考，避免走弯路，浪费资源，也算是为抗击疫情尽一份力量。
任何技术都有优缺点，站在不同的角度，侧重点不一样，或者使用的参数或算法或软件不一样，结论也可能各有所异。理论分析毕竟与临床样本检验的结果不可同日而语。产品的灵敏度最终都得经过临床试验，达到注册检验要求为标准。文中观点难免偏颇，欢迎批评指正。
